班氏试剂的配制与鉴定结果

枯灯石佛

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2016-05-13 | 阅读:

  班氏试剂的配置
取无水硫酸铜1.47g,溶于100ml热水中,冷却后稀释到150ml,取柠檬酸钠173g,无水碳酸钠100g和600ml水共热,溶后冷却并加水至 850ml,再将冷却的150ml硫酸铜倾入即可。

鉴定糖尿的结果

沸水浴加热后的现象             葡萄糖含量(g/dl)
透明蓝色                  无
加热时无变化,仅冷却后有少量沉淀    微量,约0.5以下 
加热1分钟后即出现少量黄绿色沉淀    少量,约 0.5-1
加热10-15秒后即出现土黄色沉淀     中量,约1-2
加热时很快出现多量砖红色沉淀      大量,约2以上

班氏试剂与斐林试剂比较:
首先,两者的配方不一样。斐林试剂主要由质量浓度为0.1g·mL-1的NaOH溶液和质量浓度为0.05g·mL-1的CuSO4溶液配制而成。其中0.1g·mL-1的NaOH溶液称为斐林试剂甲,0.05g·mL-1的CuSO4溶液称为斐林试剂乙。而班氏试剂的配方为:①400mL水中加85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠;②50mL加热的水中加入8.5g无水硫酸铜,制成CuO4溶液;③把CuSO4溶液倒入柠檬酸钠?Na2CO3溶液中,边加边搅,如产生沉淀可滤去。
其次,两者在反应原理上略有差别。利用斐林试剂鉴定时,斐林试剂甲和斐林试剂乙直接反应产生Cu(OH)2,Cu(OH)2和可溶性还原糖反应产生砖红色沉淀。而班氏试剂中Cu(OH)2的产生却是这样的:柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐,在水中它们均可水解产生OH-,与柠檬酸钠?Na2CO3溶液和CuSO4溶液混合时,Cu2+和OH-结合,生成Cu(OH)2,Cu(OH)2与葡萄糖中的醛基反应产生砖红色沉淀。
第三,两种试剂的保存方式不同。斐林试剂甲和斐林试剂乙可强烈反应产生Cu(OH)2,Cu(OH)2很容易沉淀析出,因此斐林试剂一般为现用现配;而班氏试剂的配方中,柠檬酸钠?Na2CO3为一对缓冲物质,产生的OH-数量有限,与CuSO4溶液混合后产生的Cu(OH)2浓度相对较低,不易析出,因此该试剂可长期保存。
无论利用班氏试剂还是斐林试剂,归根结底都是Cu(OH)2与醛基反应而生成砖红色的Cu2O沉淀,因此两者反应现象一样25v;

可溶性还原糖的鉴定:
生物组织中普遍存在的可溶性糖种类较多,常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。葡萄糖、果糖和麦芽糖的分子内含有醛基,醛基具有还原性,可与弱氧化剂反应。与醛基有特定颜色反应的化学试剂可用来鉴定这三种糖的存在。
(1) 利用斐林试剂:斐林试剂由质量浓度为0.1g/mL的Na0H溶液和质量浓度为0.05g/mLL的CuS04溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的Cu2O沉淀,醛基则被氧化为羧基。可见用斐林试剂只能鉴定还原性糖,不能鉴定可溶性的非还原性糖。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。
(2)利用班氏试剂:班氏试剂由A液(硫酸铜溶液),B液(柠檬酸钠和碳酸溶液)配制而成。将A溶液倾注人B液中,边加边搅,如有沉淀可过滤。实验原理与斐林试剂相似,所不同的是班氏试剂可长期使用。
(3) 利用银氨溶液:银氨溶液是在2%的AgNO3溶液中逐滴滴人2%的稀氨水,至最初产生的沉淀恰好溶解为止,这时得到的溶液就是银氨溶液。银氨溶液中含有 Ag(NH3)20H(氢氧化二氨合银),这是一种弱氧化剂,能把醛基氧化成羧基,同时Ag+被还原成金属银。还原生成的银附着在试管壁上,形成银镜。可见,银镜反应也可用于鉴定可溶性还原糖。鉴定的结果是出现银镜。
2.用班氏试剂鉴定可溶性还原糖,比用斐林试剂更简便。
斐林试剂要现配现用,否则实验难以得到满意结果,因为此反应利用的是斐林试剂中的Cu(OH)2产物作为弱氧化剂参与与还原糖的反应,而我们知道,Cu(OH)2是一种沉淀物质,放置过久沉淀过多则不利于反应,而班氏试剂是斐林试剂的改良,它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂,使溶液稳定、灵敏度高且可以长期使用,故更简便。
3.利用斐林试剂或班氏试剂可以进行尿糖检测。
实验原理 尿液中葡萄糖属可溶性还原糖,可以用班氏试剂或斐林试剂检验。
材料器具 人体新鲜尿液,试管,酒精灯,试管夹,火柴,滴管,班氏试剂。
步骤
(1)在试管中加入1mL班氏试剂,加热到沸腾,如不变色,则可使用。
(2)再在试管中滴人2滴新鲜澄清的尿液,摇匀。
(3)加热上述混合液到沸腾,并持续2min~3min。
(4)观察试管内混合液颜色是否发生变化,是否有沉淀物产生,并按表5提示作出判断记录。
混合液现象 —记录符号 含糖量
混合液呈蓝色或蓝灰色 - 0.02g/100mL
出现浅黄绿色沉淀 + (0.1~0.5g)/100mL
出现黄绿色沉淀 ++ (0.5~1.4g)/100mL
出现黄色沉淀 +++ (1.4~2.0g)/100mL
出现橘黄色沉淀 ++++ 2.0g/100mL
注意事项:
(1)班氏试剂和尿液混合液的体积比例应为10:1。
(2)如是糖尿病人,检验前两三天最好停止服药。

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